小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，用抗磷脂酰絲氨酸(PS)抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的磷脂酰絲氨酸(PS)會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗磷脂酰絲氨酸(PS)抗體和過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，抗體與結(jié)合在包被抗體上的磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，在過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，磷脂酰絲氨酸(PS)濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中磷脂酰絲氨酸(PS)的濃度。
小鼠ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：
1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié) 晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超 過(guò)50℃，使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。
使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37度溶解，每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為10000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次倍比稀釋成不同的梯度，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
小鼠ELISA試劑盒使用注意事項(xiàng)：
1.保存：小鼠ELISA試劑盒中各試劑請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)提示合理存放。在儲(chǔ)存及溫育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng) 光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2.酶標(biāo)板：剛開(kāi)啟的酶標(biāo)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成 任何影響。暫時(shí)不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放。
3.加樣：加樣或加試劑時(shí)，個(gè)孔與后一個(gè)孔的加樣時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時(shí)間好控制在10分鐘內(nèi)。
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