炎癥小體的激活有多個重要的特征，如ASC斑點(diǎn)的形成、促炎性細(xì)胞死亡、具有生物活性的IL-1β/18細(xì)胞因子的分泌以及HMGB1的表達(dá)。為了檢測這些關(guān)鍵的特征，InvivoGen開發(fā)了體外研究炎癥小體激活中最-常-用的人源THP-1單核細(xì)胞系模型和廣泛用于報(bào)告系統(tǒng)的人源HEK293胚胎腎細(xì)胞系所衍生的細(xì)胞工具。

檢測炎癥小體激活的方法

1.使用RT-qPCR檢測NF-κB誘導(dǎo)的pro-IL-1β和NLRP3上調(diào)

2.使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測細(xì)胞系中ASC斑點(diǎn)的形成

3.使用 Western blot 檢測 caspase-1 的裂解或 pro-IL-1β/IL-18 的成熟

4.使用ELISA測定IL-1β、IL-18或HMGB1的釋放

5.使用乳酸脫氫酶（LDH）測定或碘化丙啶（PI）染色法檢測細(xì)胞焦亡

6.使用檢測IL-1β、IL-18分泌的報(bào)告細(xì)胞系

以上方法各有利弊，可以適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合這些方法來檢測炎癥小體的激活。

實(shí)時監(jiān)測ASC斑點(diǎn)

THP1-ASC-GFP Cells

THP1-ASC-GFP細(xì)胞可通過熒光顯微鏡觀察活細(xì)胞中ASC斑點(diǎn)的形成。它們以依賴NF-κB的方式穩(wěn)定表達(dá)ASC::GFP融合蛋白。在誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)的刺激下，炎癥小體的激活可以通過觀察熒光ASC斑點(diǎn)的組裝來分析，不會干預(yù)炎癥小體的應(yīng)答。

監(jiān)測細(xì)胞焦亡

THP1-HMGB1-Lucia™ Cells

THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞是一種可靠、方便的定量檢測細(xì)胞焦亡的工具，能取代測定LDH活性的經(jīng)典方法。此測定依賴于細(xì)胞溶解介導(dǎo)的HMGB1警報(bào)素，通過與Lucia熒光素酶的融合來測量其釋放。THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞經(jīng)LPS啟動和炎癥誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)處理后引發(fā)細(xì)胞焦亡，從而釋放HMGB1::Lucia到細(xì)胞外環(huán)境中。通過測量QUANTI-Luc™檢測試劑產(chǎn)生的光信號，可以簡單監(jiān)測上清液中HMGB1::Lucia的水平。

實(shí)時監(jiān)測IL-1β和IL-18的分泌

InvivoGen已開發(fā)出報(bào)告細(xì)胞系，能簡單、快速、可靠地檢測和定量具有生物活性的人源（h）或鼠源（m）IL-1β和IL-18。這些細(xì)胞來源于人源胚胎腎HEK293細(xì)胞系。在激活細(xì)胞因子信號通路后，它們表達(dá)由NF-κB/AP-1誘導(dǎo)的分泌型堿性磷酸酶（SEAP）報(bào)告基因。使用QUANTI-Blue™溶液檢測試劑可以很容易地監(jiān)測上清液中的SEAP水平。

HEK-Blue™ IL-1β Cells& HEK-Blue™ IL-1R Cells

這些細(xì)胞可以監(jiān)測樣本中的hIL-1α/β、mIL-1α/β。兩種細(xì)胞系均表達(dá)內(nèi)源性人源IL-1受體（hIL-1R）。HEK-Blue™ IL-1β細(xì)胞對人源IL-1異構(gòu)體的敏感性高于鼠源的異構(gòu)體。我們建議使用此細(xì)胞系來進(jìn)行人源炎癥小體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(例如THP1衍生分析，見第6-7頁)，測試上清液樣本。HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)mIL-1R，賦予對mIL-1β更高的敏感性。因此，該細(xì)胞系更適合于從小鼠的血清或細(xì)胞突變物中檢測IL-1β。然而，它們的高靈敏度可以導(dǎo)致一些細(xì)胞（例如RAW264.7衍生細(xì)胞）出現(xiàn)高背景。

值得注意的是，這兩種細(xì)胞系都可以用來評估樣本中IL-1α警報(bào)素的水平。HEK-Blue™ IL-1β 和 HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞檢測一種亞型的特異性可通過在分析中加入針對另一種亞型的中和抗體來評估。

HEK-Blue™ IL-18 Cells

這些細(xì)胞提供了一個強(qiáng)大的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺，監(jiān)測樣本中hIL-18和mIL-18的濃度。HEK-Blue™ IL-18細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)hIL-18受體。這些細(xì)胞對hIL-18比mIL-18敏感。

使用Invivogen的細(xì)胞因子傳感器細(xì)胞

1.檢測具生物活性的細(xì)胞因子

2.具成本效益

3.短時間的實(shí)驗(yàn)操作

4.肉眼可視化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.高靈敏度、高動態(tài)范圍

6.適用于藥物篩選（正?；蚋咄亢Y選、藥物效應(yīng)動力學(xué)等）

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文獻(xiàn)參考：

Martine P. et al. 2019. Cell Death Dis. doi: 10.1038/s41419-019-1491-7. HSP70 is a negative regulator of NLRP3 inflammasome activation.

Metho S. et al. 2019. Mol. Cell. doi: 10.1016/j.molcel.2018.11.08. The Crohn’s disease risk factor IRGM limits NLRP3 inflammasome activation by impeding its assembly and by mediating its selective autophagy.

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